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乳酸菌菌種的分離篩選方法
乳酸片球菌細(xì)胞呈球狀，直徑0.6~1.0μm，在直角兩個(gè)平面交替形成四聯(lián)狀，一般細(xì)胞成對(duì)生，單生者罕見，不成鏈狀排列。革蘭氏陽性，不運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧。在MRS培養(yǎng)基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺線的生長物呈絲狀。ATCC細(xì)胞,傳代細(xì)胞
乳酸菌在一般瓊脂培養(yǎng)基上形成微小菌落，不易觀察，所以分離時(shí)先富集培養(yǎng)并選擇合適的培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)基一般添加西紅柿、酵母膏、吐溫-80等物質(zhì)，也常常加入醋酸鹽，因醋酸鹽能抑制部分細(xì)菌生長，對(duì)乳酸菌無害。
培養(yǎng)基中添加碳酸鈣，乳酸溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣形成透明圈，作為分離鑒別的依據(jù)，通過對(duì)生成的乳酸量進(jìn)行性能鑒定。
乳酸菌生長繁殖時(shí)需要多種氨基酸，維生素及微氧，一般菌落比較小。
分離培養(yǎng)基一般可添加西紅柿 酵母膏 油酸 吐溫等物質(zhì)，均具有促進(jìn)生長作用。也常常添加醋酸鹽抑制有些細(xì)菌的生長，對(duì)乳酸菌無害。
篩選方法：
溶鈣圈法： 利用一些產(chǎn)酸類細(xì)菌在含CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生CaCO3溶解圈，從而篩選出這些產(chǎn)酸類細(xì)菌，可用于乳酸菌的篩選。
其中培養(yǎng)基中加入CaCO3的作用是：①鑒別能產(chǎn)生酸的細(xì)菌；②中和產(chǎn)生的酸，以維持培養(yǎng)基的PH。
葡萄糖20g/L 酵母膏10g/L PH6.0-6.5
蛋白胨 8- 10 g/L 酵母膏 3- 5g/L 葡萄糖13- 15g/L KH2PO4 1.5- 2.0g/L MgSO4 0.3-0.5 g/L MnSO4 0.2-0.25g/L NaAC 3.0-5.0g/L PH 5.5-6.5
蛋白胨 0.8- 1.0g/L 糖蜜 3.0-5.0g/L 酵母膏 3-5g/L 玉米漿0.5- 1.0g/L KH2PO4 0.1- 0.3g/L MgSO4 0.3-0.5g/L NaC13-5g/L 葡萄糖 8-10g/L PH5.5-6.5（發(fā)酵或種子培養(yǎng)基）
MRS培養(yǎng)基 （分離培養(yǎng)計(jì)數(shù)用）
蛋白胨 10.0g、牛肉膏 10.0g、 酵母膏 5.0g、 檸檬酸氫二銨 2.0g、 葡萄糖 20.0g、 吐溫 80 1.0mL、 乙酸鈉 5.0g、 磷酸氫二鉀 2.0g、硫酸鎂 0.58g、硫酸錳 0.25g、瓊脂 18.0g、 蒸餾水1L, pH 6.5。（分離培養(yǎng)基），
當(dāng)MRS培養(yǎng)基冷卻至45～50℃時(shí),加入已滅菌的碳酸鈣, 充分混勻,倒平板。 1.8 BCP培養(yǎng)基（溴甲酚紫培養(yǎng)基） 乳糖5.0g 蛋白胨 5.0g 酵母膏 3.0g 0.5℅溴甲酚紫10ml 自來水1000ml pH6.5-7.0 （分離用）
BCG牛乳營養(yǎng)瓊脂：脫脂奶粉10g，溶于50ml水中，加入1.6℅溴甲酚綠酒精溶液0.07ml，0.075Mpa 20min。另取瓊脂2.0g，溶于50ml水中，加酵母膏 1.0g 溶解后調(diào)pH6.5-6.8，0.1 Mpa 20min.趁熱在無菌操作下兩者混合均勻， 倒平板，37℃培養(yǎng)24h，檢查是否有雜菌。
篩選過程：樣品預(yù)處理→梯度稀釋至10-6→選擇合適的稀釋度涂布→37℃培養(yǎng)
48h→挑選產(chǎn)生溶鈣圈的菌落反復(fù)在MRS培養(yǎng)基上劃線→挑起單菌落染色，經(jīng)鏡檢確認(rèn)為純種→挑選革蘭氏陽性單菌落→試管穿刺4℃冰箱保存。
溴甲酚綠指示劑法：
培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基（含溴甲酚綠酒精溶液）
篩選過程：同上，不同之處是稀釋涂布后長出菌落，挑取使溴甲酚綠變色的菌落。
菌種的分離篩選 1.培養(yǎng)基：
麥芽汁碳酸鈣培養(yǎng)基：
麥芽汁（10BX）1L 預(yù)先滅菌碳酸鈣5-10g/L PH自然 （分離用）
牛肉膏 10g/L 蛋白胨 10g/L 酵母膏 10g/L 番茄汁200g/L 葡萄糖 10g/L 吐溫0.05% CaCO315-20g/L 溴甲酚綠 0.01% PH6.0-6.5（分離用）
番茄汁碳酸鈣培養(yǎng)基：酵母膏7.5g/L 葡萄糖10g/L 番茄汁100mL 蛋白胨7.5g/L KH2PO4 2.0 g/L 吐溫0.5mL PH6.0-6.5 （分離用）
