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人庚型肝炎病毒IgG（HGV-IgG）ELISA試劑盒說明書

2014年08月03日 18:16上海瑤韻生物科技有限公司點(diǎn)擊量：2018

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

檢測原理

試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人庚型肝炎病毒的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人庚型肝炎病毒IgG（HGV-IgG）的存在與否。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標(biāo)儀（450nm）
  2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

  1.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
  2.   實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
  3.   預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的*檢測效果。
  4.   嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

無

陰性對照

0.5mL

0.5mL

無

陽性對照

0.5mL

0.5mL

無

檢測抗原-HRP

10mL

5mL

無

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

樣本稀釋液

6mL

3mL

無

底物A

6mL

3mL

無

底物B

6mL

3mL

無

終止液

6mL

3mL

無

封板膜

2張

2張

無

說明書

1份

1份

無

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無

 

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
  2.   自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
  3.   待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
  4.   隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

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