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晶抗生物流式細(xì)胞檢測(cè)樣本如何保存方法如下

2023年07月03日 09:11上海晶抗生物工程有限公司點(diǎn)擊量：3070

全血樣本：一般來說，血液樣本必須在6個(gè)小時(shí)內(nèi)處理，晚不得超過12小時(shí)；做完染色后，需要放在多聚甲醛中保存，一般可以存放3天左右。

培養(yǎng)細(xì)胞樣本：培養(yǎng)的細(xì)胞可以用多聚甲醛保存。做DNA倍體的樣本：將樣本保存在70%的乙醇中，并適量加入血清，-70℃冰箱保存，可以幾個(gè)月內(nèi)檢測(cè)。


抗體染色的流式細(xì)胞不能立即檢測(cè)該如何處理？

如果實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞活性要求比較高，如凋亡實(shí)驗(yàn)，必須盡快檢測(cè)；如果實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞活性要求不高，可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定樣本30分鐘，固定后的細(xì)胞4℃過夜保存，次日檢測(cè)。


同型對(duì)照的作用是什么？

抗體有時(shí)會(huì)和非抗原結(jié)合，可能會(huì)因?yàn)榉翘禺惖牡鞍?蛋白相互作用結(jié)合細(xì)胞內(nèi)成分，因?yàn)槭杷饔媒Y(jié)合脂肪，也可能會(huì)結(jié)合一些細(xì)胞表面表達(dá)的抗體受體。比如，IgG亞型的抗體會(huì)結(jié)合細(xì)胞表面的Fc受體，如CD16、CD32和CD64。理想條件下，各種類型的非特異性結(jié)合都可以通過蛋白（BSA、牛奶或動(dòng)物血清）來阻斷。Fc受體的結(jié)合則可以通過與含免疫球蛋白的血清預(yù)孵育來阻斷。一個(gè)抗體非特異性相互作用和受體結(jié)合的情況，可以用無關(guān)抗原的相同亞型抗體來比照。


什么時(shí)候需要使用同型對(duì)照？

做胞內(nèi)流式實(shí)驗(yàn)：比如流式細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子、趨化因子和信號(hào)蛋白等。

表面標(biāo)志特異性不高或者不常見的： 一些特異性不高的抗體，如多抗，非特異性結(jié)合非常多，使用同型對(duì)照可排除假陽性； 因?yàn)椴皇煜げ怀Ｒ姌?biāo)志的表達(dá)情況，根據(jù)同型對(duì)照可以判斷陽性細(xì)胞的位置，對(duì)流式非常熟悉，且檢測(cè)的是CD3、CD4、CD19等表達(dá)強(qiáng)度非常高的標(biāo)志，可以不使用同型對(duì)照。


怎樣選擇同型對(duì)照？

一般選擇與一抗的成分相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標(biāo)記的抗體比如抗人的CD56 FITC標(biāo)記的抗體，亞型是Mouse IgG1,κ，那么它的同型對(duì)照應(yīng)該是FITC標(biāo)記的Mouse IgG1,κ，如果是抗體的組合形式，純化的一抗＋熒光標(biāo)記的二抗，那么應(yīng)該選擇一抗的同型對(duì)照比如CD86的純化抗體，亞型是Mouse IgG1,κ，二抗是PE標(biāo)記的抗小鼠IgG1，那么它的同型對(duì)照是純化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下：樣本管，純化的CD86＋PE標(biāo)記的抗Mouse IgG1(二抗)＋樣本；同型對(duì)照管，純化的同型對(duì)照＋PE標(biāo)記的抗Mouse IgG1(二抗)＋樣本。


如果沒有找到適合的同型對(duì)照，在保持來源相同、熒光標(biāo)記相同、免疫球蛋白類別相同條件下，優(yōu)先選擇的順序是亞鏈不同--亞型不同--相同類別比如，某抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型對(duì)照表里找不到相同的同型對(duì)照，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記Mouse IgG2а為同型對(duì)照；如果也沒有找到Mouse IgG2а，那么優(yōu)先選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2b作為同型對(duì)照；如果后還是沒有找到Mouse IgG2b，那么選擇相同熒光標(biāo)記的Mouse IgG2作為同型對(duì)照。


為什么有時(shí)候同型對(duì)照的表達(dá)會(huì)比抗體的表達(dá)高？

首先需要檢查同型對(duì)照是否加錯(cuò)類型、劑量等。其次，因?yàn)橛行?biāo)志在細(xì)胞的表面或者胞內(nèi)表達(dá)不高，而跟其類似的抗原非常多，那么加入同型對(duì)照時(shí)，同型對(duì)照非特異性的結(jié)合會(huì)超過抗體的特異性，所以會(huì)造成這種現(xiàn)象。這個(gè)時(shí)候推薦使用其他陰性對(duì)照，如空白對(duì)照等。


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