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ELISA試劑盒操作方法

閱讀:246發布時間:2015-4-12

ELISA試劑盒操作方法:

1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5.于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6.可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 

ELISA試劑盒是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法,由于其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析等優點,已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域。


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