上海紀(jì)寧生物實(shí)驗(yàn)前如何做好ELISA試劑盒優(yōu)化

時(shí)間：2023/7/25閱讀：255

ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化：

1,包被液的挑選：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，假定包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也能夠運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。

2,包被濃度的挑選：包被的適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改動(dòng)，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要清楚關(guān)于特定包被抗原的適包被濃度需求通過實(shí)驗(yàn)來斷定。

3,包被溫度的挑選：一般是4-8度條件下放置一個(gè)黑夜或許37度保溫2小時(shí)，咱們激烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的堅(jiān)持。

4,包被抗原的挑選：可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物，由于分子量太小，一般難于直接吸附在酶標(biāo)板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)，比如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。

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ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化：

在這一進(jìn)程中，一般狀況下有三次加樣，它們分別是加標(biāo)本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充沛混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上激烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標(biāo)本，然后在微型顫動(dòng)器上顫動(dòng)1分鐘以確保混和。一般說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，逾越一星期測(cè)定的需低溫冰存。

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