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紀寧實業原代細胞常見樣本的制備與技術分析

時間:2023/4/6閱讀:399
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原代細胞是當代細胞分析技術之一,包括細胞計數、細胞內/外抗原分子檢測、細胞中DNA和RNA的倍體分析、細胞的生物學特性及功能分析等。

對于流式細胞分析而言,樣本制備的好壞對終的檢測結果有很大的影響。在免疫學和血液學中,應用流式細胞技術分析的樣本多為外周血、骨髓、各類體液(如腦脊液、胸水、腹水)以及人體的組織(如淋巴結、脾、肝等),這幾種樣本要如何制備和保存呢?


保存方法

收集樣本后置于加有抗凝劑(一般選擇肝素或EDTA)的試管中,室溫保存,盡量在12 h內處理樣本;若無法及時處理,4℃保存,此時好選擇肝素抗凝管。一般不需要特殊處理制備單細胞懸液,所用試劑為淋巴細胞分離液和紅細胞裂解液。但在臨床檢測中,為了避免細胞成分丟失,通常不推薦使用淋巴細胞分離液分離單核細胞。


EDTA適用于白細胞的免疫表型分析,可防止成熟的髓系細胞貼壁造成細胞損失,并具有較強的抗血小板凝集能力,但對細胞活性的保持不如肝素抗凝。原代細胞同時EDTA是二價陽離子的強螯合劑,會影響與Ca2+相關的抗原位點(如CD11b等),并會抑制與Ca2+ 相關的細胞功能。肝素常用于白細胞功能研究,可維持Ca2+和Mg2+在細胞內的生理濃度,更好保持細胞活性,適用于放置時間較長、不能及時檢測的樣本,但不適合血小板的相關檢測。收集樣本后置于肝素抗凝管中,室溫保存,且盡量在12 h內處理樣本。若無法及時處理,則4℃保存,時間好不超過48 h。


處理方法

樣本1000-1500 rpm離心5 min,棄去上清;

加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(PBS),離心洗滌5 min;

加入適量PBS重懸。如有細小沉淀,用300目尼龍網過濾后備用。


切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中,室溫保存,原代細胞盡量在12 h內處理樣本;若無法及時處理,4℃保存,保存時間好不要超過48 h。不建議用甲醛、乙醇固定細胞,不要用酶、表面活性劑處理細胞。

上海紀寧實業有限公司采用先進的技術和設備,確保品質的同時,降低成本,為更多有需要的研究人員,節省實驗經費,保證實驗質量,為國家的科技發展多做貢獻。



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