大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）試劑盒使用說(shuō)明
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
（NAG）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水
平。用純化的大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入 NAG，再與 HRP 標(biāo)記的 NAG 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶
標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶（NAG）濃度。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)中
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
（NAG）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水
平。用純化的大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入 NAG，再與 HRP 標(biāo)記的 NAG 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶
標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶（NAG）濃度。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）
2．抗原修復(fù)液（依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調(diào) pH 值至 6.0，后定容至 1000mL
或：0.5M EDTA 修復(fù)液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調(diào) pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL
4. Tween 20 5 mL
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