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武漢艾美捷科技有限公司
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閱讀：3818發布時間：2020-6-28
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。 原理： 當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在Argarose Beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
優點： （1）相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的，處于天然狀態； （2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響； （3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。 缺點： （1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用； （2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用； （3）必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。 （4）靈敏度沒有親和色譜高。 常見問題：在免疫沉淀實驗后的WB驗證環節中，當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時，通常會出現對應免疫沉淀一抗的重鏈（50 kDa）和輕鏈（25 kDa）的兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近時，就會受到這兩條帶的干擾。 Abbkine解決方案：產生此問題的重點在于實驗中目的蛋白的信號模糊，無法進行判斷，那就需要在根本上將干擾的信號降到低，而IPKine系列二抗經過特別設計和優化，可以和重/輕鏈特異性結合從而明顯看到目的蛋白信號。如果目的條帶在55kDa左右，可以通過選擇與輕鏈特異性結合的二抗，來消除重鏈條帶對目的蛋白檢測的干擾。如下圖：
IPKine山羊抗小鼠IgG輕鏈二抗 消除重鏈干擾，貨號：A25012 IPKine小鼠抗兔IgG輕鏈二抗 消除重鏈干擾，貨號：A25022 IPKine山羊抗小鼠IgG重鏈二抗 消除輕鏈干擾，貨號：A25112 IPKine山羊抗兔IgG重鏈二抗 消除輕鏈干擾，貨號：A25222 IPKine是一系列新型的二抗產品，能有效解決IP-WB后的輕/重鏈干擾問題。IPKine系列二抗經過特別優化，不會與IgG的輕/重鏈分子結合，只識別IgG分子的重/輕鏈部分，從而能有效解決IP實驗后的WB檢測中面臨的輕/重鏈干擾信號降到低。 另外，IPKine系列二抗經過特別優化，其針對目的種屬的特異性非常高，同時針對其他非目的種屬的抗體分子的非特異性結合降到低，從而有效避免了二抗與樣本內免疫球蛋白分子的非特異性雜交，提高實驗的特異性和信噪比。 特點與優勢： 1，小包裝即用型試劑，性價比高； 2，更干凈的背景，更清晰的條帶，卓丨越的信噪比； 3，完美避免抗體重鏈或者輕鏈的干擾問題； 4，使用簡便，無需額外的試劑和操作步驟； 5，經特殊優化，與其它種屬的IgG分子的交叉反應極低。 |
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