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質粒DNA純化和內毒素去除方案打包組合

閱讀:252發布時間:2020-4-13

質粒是在染色體或核區之外能夠自主復制的雙鏈閉合環狀DNA分子,以超螺旋狀態存在,幾乎*裸露,主要發現于細菌、放線菌和真菌細胞中。質粒具有自主復制和轉錄能力,能在子代細胞中保持恒定的拷貝數,并表達所攜帶的遺傳信息。

質粒DNA廣泛應用于基因工程、生物醫學的研究以及生物產品的開發和應用。質粒DNA純化是其應用的關鍵步驟,直接影響到轉化、測序、PCR、酶切和轉染等下游實驗。一般質粒DNA約為2~20kb,初步純化的質粒DNA構型分為超螺旋、開口環狀及線性3種,其中超螺旋結構的質粒DNA轉化和表達效率zui高。質粒DNA安全性好、毒性低和免疫原性較低、便于分離和提取,在DNA重組技術、轉基因方面有廣泛應用。

 

內毒素又稱脂多糖,是革蘭陰性菌外部細胞壁的主要成分。脂多糖由疏水的脂質A部分、核心寡糖和雜多糖鏈及菌株特異性O抗原組成,其中脂質A部分是分子內毒素活性的原因。盡管脂質A不會直接傷害任何組織,但人類和動物的免疫細胞都將其視為存在細菌的指示劑。

在質粒DNA制備的菌體裂解過程中,內毒素分子被釋放到溶菌液中。由于內毒素常形成囊狀結構,其分子量、電荷性和疏水性都與質粒DNA相似,常用的純化方法很難將內毒素與質粒DNA分開。內毒素會降低原代細胞和敏感培養細胞的轉染效率,干擾免疫細胞的體外轉染。內毒素還會導致機體發熱、低血壓、呼吸窘迫、血管內凝血及內毒素性休克綜合癥,內毒素可通過激活TLR4刺激炎癥因子IL-1、IL-6、IL-10及TNF-x的合成。國家*規定,DNA疫苗制品中內毒素含量不得高于0.01EU/ug,個人用劑量不超過20EU。

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內毒素去除*(小提),貨號:NGB-22700

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Norgen Biotek成立于1998年,公司總部位于加拿大,是一家著名化生物技術公司,生產基于磚利技術的核酸和蛋白質純化及富集產品用于研究和診斷。Norgen Biotek 在2003年獲得加拿大國家研究委員會頒發的科技創新獎,是一家致力于樣品制備并獲得ISO 9001(產品質量)、ISO 13485(產品可用于商業化的醫療設備,包括用于體外診斷領域)和ISO 15189(可用于臨床檢測機分子診斷領域的研發能力)認證的生物科技公司。目前該公司的產品多達700余種,提供1流的樣品制備試劑盒,應用于基因組和蛋白組等不同的領域。

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