一、 抗體的酶標記及質量鑒定
ELISA試劑盒本試驗采用改良過碘酸鈉法將辣根過氧化物酶標記在抗體上[1]，標記完后取上清用Sephedex G200 凝膠層析進行純化，洗脫液為0.2mol/L pH7.4的PBS，流速為15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度計測A280吸光度值，以洗脫體積為橫坐標，吸光值為縱坐標做圖，收集*峰即為酶標抗體峰。標記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標記物的A值，計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結合率以及標記率。
二、包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優化
1、包被緩沖液的優化
ELISA試劑盒包被抗原時，為了得到*的包被效果，我們采用了碳酸鹽緩沖液（50mM ph9.6 ）、磷酸鹽緩沖液（50mM ph7.6）、以及TRIS鹽酸緩沖液（50 mM ph7.6）三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動酶標儀分析，選擇*的包被緩沖液系統。同時為了保證緩沖液能夠長期保存，我們在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作為防腐劑。
2、zui適抗原包被濃度的優化
ELISA試劑盒用優化好的包被緩沖液，將包被抗原（ALB）稀釋成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六個濃度，包被微孔板，每孔100ul；競爭抗原濃度為4.0 ug/ml，2.0 ug/ml；酶標抗體稀釋度為1：300，經孵育、顯色、終止后用自動酶標儀分析。顯色的強度在一定范圍內與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
Amphiregulin 雙調蛋白（結腸直腸細胞源性生長因子）抗體
phospho-AQP2(Ser264) 磷酸化水通道蛋白2抗體
AXL 粘附相關激酶抗體
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相關激酶抗體
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-AQP2(Ser269) 磷酸化水通道蛋白2抗體
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
phospho-AKT1(Ser129) 磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
phospho-ATF4 (Ser245) 磷酸化活化轉錄因子4抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser213) 磷酸化雄激素受體抗體
phospho-Androgen Receptor (Ser650) 磷酸化雄激素受體抗體
phospho-AKT1+2+3 (Tyr315+316+312) 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗體
phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗體
phospho-ATF2(Ser472) 磷酸化活化復制因子2抗體
3-Apr 凋亡相關蛋白3抗體
