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DIY夾心法ELISA常見技術

閱讀:211發布時間:2015-5-13

DIY夾心法ELISA試劑盒常見技術指南:
1、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
2、ELISA試劑盒實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
3、標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節,將凍干的細胞因子復溶。
4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
5、為了優化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
6、若使用過氧化物酶作為顯色系統,應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7、ELISA試劑盒當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.Galectin 1    半乳糖凝集素1抗體
IFITM5    干擾素誘導跨膜蛋白5抗體
phospho-IFNAR1(Tyr466)     干擾素alpha/beta 受體1蛋白抗體
phospho-IFNGR1 (Tyr457)    干擾素gamma受體1蛋白抗體
IF3EI     真核翻譯起始因子3亞基L蛋白抗體
IFIT2    干擾素誘導的三角形四肽重復蛋白2抗體
IFIT1B     干擾素誘導的三角形四肽重復蛋白1B抗體
IBP160    160kDa內含子結合蛋白抗體
IBTK    Bruton*激酶抑制劑蛋白抗體
IFI30    γ干擾素誘導蛋白IP30抗體
IFFO    中間絲家族孤啡肽1蛋白抗體
Inversin    內臟器官發育轉位相關蛋白NPH2抗體
Insulin receptor subunit beta    胰島素受體β抗體
ITLN1    內皮細胞凝集素HL1抗體
IFN-Alpha    干擾素α抗體
IL-17F    白介素-17F抗體
IL-6 (NT)    白介素6抗體(N端)
IL-6    白介素6抗體
IFNE1    干擾素epsilon 1蛋白抗體
phospho-IKK gamma(Ser43)    磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體
phospho-IL-1R1(Tyr496)    磷酸化白介素1受體1抗體
IL-3    白介素3抗體
IDI1    異戊烯焦磷酸1抗體
phospho-IRS1(Ser789)    磷酸化胰島素受體底物-1抗體
phospho-IRS1(Ser636 + Ser639)    磷酸化胰島素受體底物-1抗體


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