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植物蛋白質的提取方法

閱讀:407發布時間:2015-11-19

一、植物組織蛋白質提取方法 
  1、根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
  2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。
  3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
  4、提取上清液,樣品制備完成。
  蛋白質提取液:300ml
  1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
  2、甘油(Glycerol)75ml            
  3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
  這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!

二、植物組織蛋白質提取方法 
  氯醋酸—丙酮沉淀法
  1、在液氮中研磨葉片
  2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上1小時)棄上清。
  3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時),然后真空干燥沉淀,備用。
  4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。
  5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。
    藥品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
    這種方法針對雙向電泳,雜質少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!



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