ES-2細胞 人卵巢透明細胞癌   微載體培養原理與操作

1.原理：其原理是將對細胞無害的顆粒-微載體加入到培養容器的培養液中，作為載體，使細
胞在微載體表面附著生長，同時通過持續攪動使微載體始終保持懸浮狀態。
貼壁依賴性細胞在微載體表面上的增殖，要經歷黏附貼壁、生長和擴展成單層三個階段。
細胞只有貼附在固體基質表面才能增殖，故細胞在微載體表面的貼附是進一步鋪展和生長的
關鍵。黏附主要是靠靜電引力和范德華力。細胞能否在微載體表面黏附，主要取決于細胞與
微載體的接觸概率和相融性。
2. 攪拌轉速：由于動物細胞無細胞壁，對剪切力敏感，ES-2細胞 人卵巢透明細胞癌  因而無法靠提高攪拌轉速來增加接觸
概率。通常的操作方式是：在貼壁期采用低攪拌轉速，時攪時停；數小時后，待細胞附著于
微載體表面時，維持設定的低轉速，進入培養階段。微載體培養的攪拌非常慢，zui大速度
75r/min。
3.細胞與微載體的相融性，ES-2細胞 人卵巢透明細胞癌 是與微載體表面理化性質有關。一般細胞在進入生理PH值時，表
面帶負電荷。若微載體帶正電荷，則利用靜電引力可加快細胞貼壁速度。若微載體帶負電荷，
因靜電斥力使細胞難于黏附貼壁，但培養液中溶有或微載體表面吸附著二價陽離子作為媒介
時，則帶負電荷的細胞也能貼附。

細胞株查詢：
ACHN    人腎癌細胞系(ACHN)
AGS    人胃腺癌細胞
AN3 CA    人子宮內膜腺癌細胞（AN3 CA）
Ana-1    小鼠巨噬細胞
Anglne    人卵巢癌細胞系(Anglne)
AR42J    胰腺細胞AR42J
AsPC-1    人轉移胰腺腺癌細胞
B82    鼠細胞系（B82）
B95-8    絨猴EBV轉化的白細胞
BALB/3T3 clone A31    小鼠胚胎成纖維細胞
Bcap-37    人乳腺癌細胞Bcap-37
Bel-7402    人肝癌細胞系(Bel-7402)
BEL-7404    人肝癌細胞
BEL-7405    人肝癌細胞
Bewo    人絨毛膜腫瘤細胞系(Bewo)
BGC-823    人胃腺癌細胞（低分化）
BHK-21    敘利亞倉鼠腎細胞系（BHK-21）
BI U－87    膀胱癌細胞（BI U－87）
BRL    大鼠肝細胞
BSC-1    猴腎細胞系(BSC-1)
BSG823    人胃癌BSG823
BT-474 [BT474]    人乳腺導管癌細胞
BT-549    人乳腺管癌細胞
BxPC-3    人原位胰腺腺癌細胞
C127    小鼠乳腺腫瘤細胞
C2C12    小鼠成肌細胞C2C12
C-33A    人子宮癌細胞C-33A
C3H/10T1/2, Clone 8    小鼠胚胎成纖維細胞
C6    大鼠膠質瘤細胞
C6/36    蚊子細胞（C6/36）
C8-D1A    鼠小腦細胞C8-D1A
Ca Ski    人宮頸癌腸轉移細胞
CA46    Burkitts淋巴瘤細胞系（CA46)
Caco-2    人結腸腺癌細胞
CaES-17    人食管癌細胞CaES-17
Caki-1    人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞
Calu-3    人肺腺癌 (胸水)
Calu-6    人退行性癌細胞
Caov－3    人乳突狀卵巢腺癌細胞（Caov－3）
Caski    人宮頸上皮細胞癌（Caski）
CBRH-7919    大鼠肝癌細胞
CCD-1095Sk    人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞
CCRF-CEM [CCRF CEM]    人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞
CFPAC-1    人胰腺癌細胞
CGM1    人EB病毒轉化的B細胞
Chang liver    人張氏肝細胞
CHL    倉鼠肺細胞
CHMAS    人肥大細胞白血病細胞CHMAS
CHO/dhFr-    倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷
CHO-K1    倉鼠卵巢細胞亞株
CHSE    鮭魚胚胎細胞CHSE
CIK    草魚腎臟細胞(CIK)
CNE    人鼻咽癌細胞CNE（低分化）
CNE2    鼻咽癌細胞CNE2
CoC1    人卵巢癌細胞系(CoC1)
CoC1/DDP    CoC1細胞耐藥亞株(CoC1/DDP)
COLO 205    人結腸癌細胞
COLO-320    人結腸腺癌細胞
COS-1    非洲綠猴SV40轉化的腎細胞
COS-7    非洲綠猴SV40轉化的腎細胞
CRFK    貓腎細胞
CTLA4 Ig-24    中國倉鼠卵巢細胞
CV-1 [Part of the Wistar Special Collection]    非洲綠猴腎細胞
CW-2    人結腸腺癌細胞
Dami    人巨核細胞白血病細胞
Daudi    人成巨核細胞白血病細胞
DLD-1    人結直腸腺癌上皮細胞
DMS153    人小細胞肺癌DMS153
DT40    雞淋巴瘤細胞
DU 145    人前列腺癌細胞
EAC-E2G8    鼠腹水瘤（EAC-E2G8）
EBTr (NBL-4)    牛胚氣管細胞
Eca-109    人食道癌細胞Eca-109
ECV-304    人臍靜脈內皮細胞系(ECV-304)(具有T24細胞特性)
EL-4    小鼠淋巴瘤（EL-4）
EPC    鯉魚上皮細胞EPC
ES-2    人卵巢透明細胞癌
F56    人腺癌細胞系(F56)
F81    貓腎細胞
FaDu    人咽鱗癌細胞
FG    牙鲆細胞FG

此種培養方式中，細胞貼附于固定的表面生長，不因為攪拌而跟隨培養液一起流動，因此比較容易更換培養液，不需要特殊的分離細胞和培養液的設備，可以采用灌流培養獲得高細胞密度，能有效地獲得一種產品；但擴大規模較難，不能直接監控細胞的生長情況，故多用于制備用量較小、價值高的生物藥品。

CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器是常用的貼壁培養式生物反應器，用于細胞的貼壁培養時可使用籃式攪拌系統和圓盤狀載體。此載體是直徑6毫米的無紡聚酯纖維圓片，具有很高的表面積與體積比（1200cm2/g），有利于獲得高細胞密度。籃式攪拌系統和載體培養是目前貼壁細胞培養使用zui多的方式，除用于293細胞的培養外，還用于雜交瘤細胞培養、Hela細胞培養、CHO細胞培養及其它細胞培養。此種方式培養293細胞，細胞接種后貼壁快，接種1小時后細胞貼壁率可達98%以上，采用灌流培養。整個培養周期約7-10天，細胞增殖25-50倍。

微載體培養

微載體是目前*的zui有發展前途的一種動物細胞大規模培養技術，其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點，放大容易。目前微載體培養廣泛用于培養各種類型細胞，生產蛋白質產品，如293細胞、成肌細胞、Vero細胞、CHO細胞。常用商品化微載體有三種：Cytodex?，Cytopore和Cytoline。

使用較多的反應器有兩種：貝朗公司的BIOSTAT?B反應器，使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統；NBS公司的CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器，使用Cell-lift雙篩網攪拌系統。兩種系統都能實現培養細胞和收獲產物的有效分離。

微載體培養293細胞，首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細胞可用1L spinner微載體培養系統或是其它貼壁培養方式準備，采用灌流培養，培養周期10-15天，能達到的細胞密度為5-10×106/ml。