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(一)制作準備
設備用具:切片機、恒溫箱、溶蠟箱、玻璃缸、載玻片、蓋玻片、手術刀片、鑷子、包埋盒。
試 劑 :10%福爾馬林、酒精、二甲苯、固體石蠟、蘇木精、酸水、氨水、酒精伊紅染色劑型、加拿大樹膠
(二)HE染色石蠟切片的制作過程
步驟一:取材與固定:
取動物新鮮組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液)使組織、細胞的蛋白質變性凝固,以防止細胞死后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。
步驟一:脫水透明:
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。
步驟三:浸蠟包埋:
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟*浸入組織塊后進行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。
步驟四:切片與貼片:
將包埋好的蠟塊固定于切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。
步驟四:脫蠟
常用HE染色,以增加組織細胞結構各部分的色彩差異,利于觀察。蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿性染料,可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色,被堿性染料染色的結構具有嗜堿性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將細胞質染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經由高濃度到低濃度酒精,zui后入蒸餾水,就可染色。
步驟五:染色
HE染色過程是:
小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-Swiss albino細胞
人肺癌細胞 A549 [A-549]細胞
中國倉鼠卵巢細胞(二氫葉酸還原型缺陷型) CHO/dhFr-細胞
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆) CHO-K1細胞
小鼠T淋巴瘤細胞 Cyc-Tag(S49)細胞
人前列腺癌細胞 DU 145 [DU145;DU-145]
小鼠骨髓細胞 FDC-P1細胞
大鼠垂體瘤細胞 GH3細胞
小鼠垂體瘤細胞 GT1-1細胞
人胚腎細胞 293 [HEK-293;HEK293]細胞
人宮頸癌細胞 HeLa細胞
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 MC3T3-E1細胞
人乳腺癌細胞 MCF7 [MCF-7]細胞
人乳腺癌細胞 MDA-MB-231細胞
人乳腺癌細胞 MDA-MB-435S細胞
人乳腺癌細胞 MDA-MB-453細胞
小鼠神經母細胞瘤細胞與大鼠膠質母細胞瘤細胞之融合細胞 NG108-15 [108CC15]細胞
小鼠胚胎成纖維細胞 NIH/3T3細胞
人惡性多發性畸胎瘤細胞 NTERA-2細胞
小鼠睪丸畸胎瘤細胞 P19細胞
人卵巢畸胎瘤細胞 PA-1細胞
小鼠胚胎成纖維細胞 PA12細胞
細胞庫索引:www.shtpbio.com
人胰腺癌細胞 PANC-1細胞
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞 PC-12 [PC12]細胞
人成骨肉瘤細胞 Saos-2細胞
人神經母細胞瘤細胞 SH-SY5Y細胞
人卵巢腺癌細胞 SK-OV-3 [SKOV3]細胞
人骨肉瘤細胞 U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]細胞
小鼠血細胞 WEHI-3 [WEHI3]
小鼠成纖維細胞 Φ2細胞
人橫紋肌肉瘤細胞 A-204細胞
人肺腺癌細胞 Calu-3細胞
非洲綠猴腎細胞(SV40轉化) COS-7 [COS7]細胞
人腎癌Wilms細胞 G401細胞
人肝癌細胞 Hep G2 [HepG2]細胞
人包皮成纖維細胞 HFF細胞
人早幼粒急性白血病細胞 HL-60細胞
人骨肉瘤細胞 HOS細胞
人慢性髓系白血病細胞 K562細胞
人前列腺癌細胞 LNCaP細胞
人乳腺癌細胞 MCF 7B細胞
小鼠紅白血病細胞 MEL細胞
人急性淋巴母細胞性白血病細胞 MOLT-4細胞
人胚肺成纖維細胞 MRC-5細胞
人小細胞肺癌細胞 NCI-H209細胞
人Burkitt淋巴瘤細胞 Raji細胞
細胞庫索引:www.shtpbio.com
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘。
②酸水及氨水中分色,各數秒鐘。
③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。
④入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
步驟六:脫水透明:
染色后的切片經純酒精脫水,再經二甲苯使切片透明。
步驟七:封固
將已透明的切片滴上加拿大樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標箋,切片標本就可使用。