石蠟切片制備 elisa試劑盒 說明書大全
取材與固定
切取組織時應(yīng)使用鋒利的刀、剪，切取組織塊時，從刀的根部開始向后拉動切開組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm，大小為1.5cm x 1.5cm x 0.3cm為宜。取好的組織塊用10%緩沖中性福爾馬林（甲醛）液固定24~48h。
10&福爾馬林（甲醛）：100ml甲醛+900ml水。
10%緩沖中性福爾馬林（甲醛）液：100ml甲醛+900ml水+4gNaH2PO4+6.5gNa2HPO4。
NBF另一配方：50ml甲醛+450ml水+8.18425gNa2HPO4*12H2O+2.2666gNa2HPO*2H2O
10%中性福爾馬林（甲醛）液：100ml甲醛+900ml水+碳酸鈣加至飽和 （以容器底部碳酸鈣沉淀1~2cm厚為適度）充分振蕩混合后，放置24小時取上清液使用。
固定液的用量一般為組織體積的10~20倍，容器不要過小，材料也不要太多；應(yīng)避免組織緊貼瓶底或瓶壁，以免影響固定液的滲入。
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水洗
固定后的組織塊的沖洗，一般情況下是置水下以自來水流水沖洗，這樣可以使組織中的固定液隨時溢出，洗得更干凈*，有些還需要進(jìn)行特殊的洗滌。
各種以水配制的固定液如甲醛，都必須用流水沖洗，大塊組織一般沖洗24小時，小塊組織一般沖洗2—10小時。
固定液為多聚甲醛時，用于免疫組織化學(xué)等特殊染色的應(yīng)將組織投入PB緩沖液中，每60分鐘更新洗滌液一次，累計6小時。沖洗好的組織可存放在75%酒精內(nèi)
脫水
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從30％乙醇開始，經(jīng)過50％、70％、80％、95％、100％至*脫水。一般各級乙醇中放置45min到1h。
脫水必須在有蓋瓶中進(jìn)行，以防止高濃度乙醇吸收空氣中水分導(dǎo)致濃度降低而使脫水不*。需要保存的材料可脫水至70%乙醇時停留其中，如需長期保存，可加入等量的甘油。
透明
二甲苯作用較快，透明力強，但組織塊在其中停留過久，容易收縮變脆變硬，同時若脫水不凈，就會引起不良后果，在應(yīng)用時必須特別小心。通常將組織塊先經(jīng)純乙醇與二甲苯的等體積混合液，再進(jìn)入純二甲苯，這樣可減少上述的缺點。透明時間應(yīng)由組織大小而定，—般各級停留時間在30min至2h，在純二甲苯中應(yīng)更換2次，總時間則以不超過3h為宜。材料經(jīng)過透明，會顯示出前一步脫水的效果如何，若脫水*，組織則顯現(xiàn)透明狀態(tài)，如組織中有白色云霧狀，說明脫水不凈，須返工處理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明時，應(yīng)避免其揮發(fā)和吸收空氣中的水分，并保持其無水狀態(tài)
透臘
透蠟須在恒溫箱中進(jìn)行，恒溫箱的溫度調(diào)節(jié)至高于石蠟熔點3度，使經(jīng)過透明的組織塊依次用石蠟與二甲苯的等量混合液、純石蠟處理。純石蠟應(yīng)處理2～3次，透蠟的時間依材料性質(zhì)而定，一般每次需15～30min。
在60度恒溫蠟箱中放置3個蠟杯，分別編號1（52℃~54℃）、2（52℃~54℃，或54℃~56℃）、3（56℃~58℃），其中分別盛軟蠟、軟蠟、硬蠟，取透明好的組織塊放入軟蠟中各1小時，迅速取出放入硬蠟，如果時間來及包埋，可以將已經(jīng)完成浸蠟的組織塊取出放在溫箱外，第二天繼續(xù)。
包埋
包埋是使浸透蠟的組織塊包裹在石蠟中。具體做法是；先準(zhǔn)備好紙盒，將熔蠟倒入盒內(nèi)，迅速用預(yù)溫的鑷子夾取組織塊平放在紙盒底部，切面朝下，再輕輕提起紙盒，平放在冷水中，待表面石蠟?zāi)毯罅⒓磳⒓埡邪慈胨校蛊溲杆倮鋮s凝固，30min后取出。
包埋用蠟的溫度應(yīng)略高于透蠟溫度，保證組織塊與周圍石蠟*融為一體。石蠟的迅速冷卻也很重要，否則包埋塊中將會產(chǎn)生結(jié)晶。以后切片時引起碎裂。
①準(zhǔn)備包埋蠟：一般應(yīng)用硬蠟（56~58℃或60~62℃）為好，所用的石蠟要求透明無雜質(zhì)，新的石蠟要反復(fù)熔凝，并有一定的粘韌性，可以加一些蜂蠟。蠟的熔點應(yīng)與組織的硬度相適應(yīng)。包埋用過的石蠟可以反復(fù)使用。
②準(zhǔn)備包埋框：可以用金屬的，也可以用硬紙摺疊。
③點燃酒精燈，準(zhǔn)備好無齒尖鑷子，需作標(biāo)記應(yīng)先寫好標(biāo)簽。
④在金屬框中倒入硬蠟，然后用無齒鑷子取組織塊放入石蠟中，置好方向。可室溫下冷卻。
⑤包埋框或紙盒內(nèi)的蠟逐漸凝結(jié)，若表面已凝結(jié)形成一層固體狀，即可放入冷水中，加速其凝固。
⑥待蠟塊*凝固以后，便可拆卸包埋框架， 或拆開紙盒，取出蠟塊。
切片
展片、撈片和貼片
烤片
展好的切片在室溫下稍微干燥后，放在40℃恒溫烤箱中，小片組織30分鐘即可，大的需12~24小時，烤干備用。
