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正常細胞和腫瘤細胞查詢(買一株送一株)

時間:2013/11/15閱讀:1513
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 正常細胞和腫瘤細胞查詢(買一株送一株)

 
 
一、微量全血培養
(一)原理
人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞,正常情況下處于G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin,植物血凝素)是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑,它能使處于G0期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞,進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。
人體微量全血培養是一種簡單的淋巴細胞培養方法。此法采血量少、操作簡便,在 PHA作用下進行短期培養即可獲豐富的、有絲分裂活躍的淋巴母細胞,適于制備核型標本。各種因素的效應(如病毒、電離輻射、化學藥劑等)也可在淋巴細胞的培養條件下進行觀察,從而進行多種在體內無法進行的研究。因此它是細胞生物學及其它學科研究中的一種有效的方法。
(二)操作
1.打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺,點燃煤氣燈。用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面,然后將培養液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
2.在超凈臺內將每個培養瓶裝入5ml培養液及0.2ml PHA溶液,封好備用。
3.用5ml注射器,7號針頭,先吸取少許肝素濕潤針筒,然后從肘靜脈抽血l~2ml。
每個培養瓶接種全血O.2ml左右輕輕搖動使血和培養液混勻。
4.在培養瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等,放入培養箱中37℃培養。每天輕輕震蕩培養瓶二、三次,防止血球沉積并保證血細胞與培養液充分接觸,促進細胞生長繁殖。
 
 
 
 
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人肺鱗癌瘤株LTEP-s  
人肺鱗癌細胞NCI-H1703  
人肺鱗癌細胞NCI-H2170  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H524  
人肺腺癌細胞SPC-A1  
人肺癌細胞A549  
人非小細胞肺癌細胞H125  
人肺癌細胞H1299  
人肺癌細胞TKB-1  
人肺腺癌細胞LTEP-a-2  
人肺腺癌細胞Lu-165  
人大細胞肺癌細胞NCI-H460  
人肺腺癌細胞SPC-A-1  
人高轉移肺癌細胞095-D  
人肺鱗癌細胞SK-MES-1  
人大細胞肺癌細胞NCI-H661  
人肺黏液上皮樣癌細胞NCI-H292  
人肺退行性癌細胞Calu-6  
人肺腺癌細胞NCI-H1395  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H358  
人非小細胞肺癌細胞HCC827  
人典型小細胞肺癌細胞NCI-H1688  
人非小細胞肺癌細胞NCI-H1299  
人胚肺二倍體細胞2BS  
人支氣管上皮樣細胞BEAS-2B  
人胚肺成纖維細胞CCC-HPF-1  
人胚胎氣管組織來源細胞CCC-HBE-2  
人肺腺癌細胞Calu-3  
人肺退行性癌細胞Calu-6  
人小細胞肺癌細胞DMS 153  
人高轉移肺癌細胞95-D  
人低分化肺腺癌細胞GLC-82  
人肺細胞HLF-a  
人胚肺二倍體細胞HEL-1  
人胚肺二倍體細胞HEL-2  
   正常細胞和腫瘤細胞查詢(買一株送一株)
人肺癌細胞H1299  
人非小細胞肺癌細胞HCC827  
人胚肺二倍體細胞KMB-17  
人胚肺細胞系KuMA  
人肺鱗癌細胞LTEP-s  
人小細胞肺癌細胞LTEP-sm  
人肺鱗癌瘤株LTEP-s  
人肺腺癌細胞LTEP-a-2  
人肺腺癌細胞Lu-165  
 
 
 
 
 
 
二、人淋巴細胞染色體標本制備
(一)原理
在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素,破壞細胞紡錘體的形成,使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞,低滲處理,使細胞脹大,染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質,使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片,然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。
(二)操作
1.微量全血細胞培養至68小時左右,用1ml注射器 號針頭向每個5ml培養瓶內加2滴秋水仙素溶液,搖勻后繼續培養3小時,此項操作不需要嚴格無菌。
2.按時終止培養,用吸管溫和吹打成細胞懸液后,移至10ml離心管中。用天平平衡后以1000rpm離心8分鐘,棄大部上清,剩0.5ml。再吹打成細胞懸液,加入預熱37℃的 0.075mol/L的KCL溶液9ml,置37℃水浴中低滲處理30分鐘(這期間配制3:1甲醇一冰醋酸固定液)。
3.向離心管中加入1ml固定液預固定。平衡后以1000rpm離心8分鐘,同樣剩 0.5ml上清。
4.輕輕將細胞吹成懸液,加5~6ml固定液,室溫下固定30分鐘。然后離心,棄上清,重復固定一次。再離心,留0.1~0.2ml上清,吹打成細胞懸液。
5.吸取1~2滴懸液,在距載片約15cm高度滴于預冷的干凈載玻片上,迅速對準細胞吹氣促進染色體分散。斜放載玻片,在空氣中晾干(此期間配制Giemsa染液,Giemsa原液和磷酸緩沖液1:10)。
6.將標本面朝下放在染色槽中,加入染液染10分鐘,自來水沖洗,晾干后觀察。
(三)結果
低倍鏡下,制片質量較好的標本上可看到有較多的分裂相,染色體之間分散良好,互不重疊。
油鏡下觀察可見每一條染色體都含有兩條染色單體,兩條單體由著絲粒相結。分區計數染色體數目并判定性別,或拍照后進行核型分析。
 
 
 

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