人單純皰疹病毒I型抗體IgM（HSV-1 IgM）Elisa操作步驟
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50$l。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40$l，然后再加待測樣品 10$l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標試劑50$l，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50$l，再加入顯色劑 B50$l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50$l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行
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人單純皰疹病毒I型抗體IgM（HSV-1 IgM）Elisa計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgM（HSV-1
IgM）陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為單純皰疹病毒 I型抗體 IgM（HSV-1 IgM）陽性
