細胞增殖-毒性檢測試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

產品簡介：

CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞増殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物。在電了耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下。可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜(Formazan)。細胞増殖越多越快，則顏色越深：細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞.顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

使用方法：

1、 在96孔板中接種細胞懸液(100ul/孔).通常細胞增值實驗每孔約2000個細胞.細胞毒性實驗每孔約5000個細胞.具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞増殖速度的快慢等因素決定。

2、 按照實驗需要.進行培養并給予0-10ul特定的藥物刺激，處理一段適當的時間(例如: 6.12.24 或48 小時)。

3、 每扎加入1Oul CCK-8溶液。如果起始的培養體枳為200ul，刻需加入2Oul CCK-8溶液，以此類推?？梢杂眉酉鄳?/span>量的細胞培養基和CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照,若擔 心所使用的藥物會干擾檢測，需設置加相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液，但不加細胞的孔作為空口對照。

4、 在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時，具體時間而以通過預實驗確定.預實驗時可以在 0.5、 1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

5、 用酶標儀測定在450 nm處的吸光值，若無450nm濾光片.可以使用420-480nm的 濾光片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作 為參考波長進行雙波長測定。

6、 如果浴要哲時不測定OD值，可以向每孔中加入lOul0.1M HCL溶液或者1% W/V的 SDS溶液，避光保存在室溫，24小時內吸光度不會發生變化。

實驗結果分析：
細胞活力=[0D（加藥）-0D（空白）]/ [OD（0加藥）-0D（空白）]x100% 
抑制率=[OD（0加藥）-OD（加藥）]/ [OD（0加藥）-OD（空白）]x100%
 OD（加藥）：具有細胞、培養基、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光值
 OD（空白）：具有培養基、CCK-8溶液，沒有細胞的孔的吸光值
OD（0加藥）：具有細胞、培養基、CCK-8溶液，沒有藥物溶液的孔的吸光值
注意事項：
1、使用96孔板進行檢測時，如果細胞培養時間較長，請注意蒸發問題。可將96孔板外圍一圈加培養基、水或PBS保濕。同時，可以把96孔板置于培養箱內靠近水盤的位置以緩解蒸發。
2、培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而不同。在正式實驗前，建議先做預實驗摸索鋪板的細胞數量以及加入CCK-8試劑后的培養時間。
3、鋪板時請注意保證每個孔細胞數量均勻，建議鋪板過程中注意時常混勻，防止因細胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8后請前后左右輕輕晃動培養板數次，使培養基和CCK-8溶液充分混勻。
4、本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待測物質有氧化性或還原性，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
5、加入CCK-8時，如果細胞培養時間較長，培養基顏色或pH值已變化，建議換用新鮮的培養基。
6、用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
7、本試劑盒系無菌灌裝生產。在使用過程中，請在生物安全柜內無菌操作，避免污染。
8、為了您的健康和安全，請穿著實驗服并戴一次性手套或乳膠手套操作。
保存方法：
0-5℃避光保存，長期保存建議-20℃，但不能反復凍融。
0-5℃條件下可保存一年。